Detta till hands använder reversibla terminatorbundna dNTP: er i en cyklisk operation som innefattar nukleotidinkorporering, fluorescensavbildning och klyvning. En fluorescerande märkt terminator avbildas när varje dNTP läggs till och klyvs sedan för att möjliggöra införlivande av nästa bas. Dessa nukleotider är kemiskt blockerad så att varje inkorporering är en unik händelse. Ett avbildningssteg följer varje basinkorporeringssteg, sedan avlägsnas den blockerade gruppen kemiskt för att förbereda varje tråd för nästa införlivning med DNA polymeras. Denna ordning efter steg av steg fortsätter under ett specifikt antal cykler, bestämt av användardefinierade instrumentinställningar. De 3'-blockerande grupperna var ursprungligen utformade som antingen enzymatisk eller kemisk reversering. Den kemiska operationen har legat till grund för Solexa- och Illumina-maskinerna. Utjämning med reversibel terminatorkemi kan vara en fyrfärgad cykel som visas av Illumina / Solexa, eller en enfärgningscykel som visas av Helicos BioSciences. Helicos BioSciences använde "virtuella terminatorer", som är oblockerade terminatorer med en andra nukleosidanalog som fungerar som en hämmare. Dessa terminatorer har lämpliga modifikationer för att avbryta eller hämma grupper så att DNA -syntesen avslutas efter en enda basaddition.
Bild 155A | PacBio SMRT-teknik och Oxford Nanopore kan använda oförändrade DNA för att möta metylering. | Nivretta Thatra / CC BY-SA (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/legalcode) | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:3rd_gen_Epigenetics.png) från Wikimedia Commons
Författare : Yavor Mendel
Kommentarer
Skicka en kommentar