SMRT-sekvensering är baserad på sekvenseringen genom syntes att vara till hands. Den DNA syntetiseras i noll-mode vågledare (ZMWs) - liten brunn-liknande behållare med infångnings verktygen belägna vid botten av brunnen. Sekvenseringen utförs med användning av omodifierat polymeras (fäst vid ZMW-botten) och fluorescerande märkta nukleotider som strömmar fritt i lösningen. Brunnarna är konstruerade på ett sådant sätt att endast den fluorescens som förekommer vid brunnens botten detekteras. Den fluorescerande etiketten lossnar från nukleotiden efter inkorporering i DNA -strängen, vilket lämnar en omodifierad DNA strå. Enligt Pacific Biosciences (PacBio), SMRT-teknikutvecklaren, tillåter denna metod detektion av nukleotidmodifieringar (såsom cytosinmetylering). Detta händer genom anmärkning av polymeraskinetik. Detta till hands gör det möjligt att analysera 20 000 nukleotider eller mer med en genomsnittlig läslängd på 5 kilobaser. Under 2015 tillkännagav Pacific Biosciences lanseringen av ett nytt sekvenseringsinstrument kallat Sequel System, med 1 miljon ZMW jämfört med 150 000 ZMW i PacBio RS II instrumentet. SMRT-sekvensering kallas "tredje generationens" eller "långlästa" sekvensering.
Bild 151A | Flera, fragmenterade sammankopplingsanalyser måste sammanställas på grundval av deras överlappande områden. | Suspencewl / CC0 | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Mapping_Reads.png) från Wikimedia Commons
Författare : Milos Pawlowski
Kommentarer
Skicka en kommentar