Kromosomorientering fluorescens in situ hybridization (CO-FISH)

CO-FISH, eller strandspecifik fluorescens in situ hybridization, underlättar strandspecifik målinriktning av DNA med fluorescerande taggade sonder. Den utnyttjar den enhetliga orienteringen av stora satelliter i förhållande till telomeres riktning, vilket oundvikligen tillåter strängar att otvetydigt betecknas som "Watson" eller "Crick" strängar. Med hjälp av enkelriktade sonder som skiljer stora satellitregioner, kopplade till fluorescerande märkta färgämnen, kan enskilda strängar bindas. För att säkerställa att endast mallsträngen är märkt måste de nybildade strängarna brytas ned genom BrdU-införlivande och fotolys. Detta protokoll erbjuder förbättrad cytogenetisk upplösning, vilket gör det möjligt för forskare att observera enstaka strängar i motsats till hela kromatider med pulsjakt-experiment. Dessutom kan icke-slumpmässig segregering av kromatider analyseras direkt genom att rikta in sig på stora satellitmarkörer.

Bild 261A | Encelliga RNA sekvense arbetsflöde | Yijyechern / Attribution-Share Alike 3.0 Unported | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:RNA-Seq_workflow-5.pdf) from Wikimedia Commons

Författare : Yavor Mendel

Referenser:

Molekylärbiologitekniker II

Tekniker för molekylärbiologi VI